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大米免疫活性肽的制备与分离纯化PPT课件下载

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大米免疫活性肽的制备与分离纯化PPT课件下载文字介绍:大米免疫活性肽的制备与分离纯化大米免疫活性肽的制备与分离纯化小组成员小组成员游海曦、赵新崎游海曦、赵新崎潘林涛、肖威潘林涛、肖威彭能、毛以恒彭能、毛以恒项目研究生指导：项目研究生指导：刘霞刘霞产品研发的内容和技术关键产品研发的内容和技术关键项目实施方案项目实施方案项目进展情况项目进展情况目录目录立项的背景和意义立项的背景和意义项目内容的调整变动项目内容的调整变动存在的问题及说明存在的问题及说明未来展望未来展望1立项的背景和意义立项的背景和意义一、立项的背景及意义一、立项的背景及意义寻求适宜的免疫调节剂来提高人体免疫能力，成为了人类社会迫切的需要大米蛋白不仅氨基酸组成平衡合理，并且还不失为一种重要的低抗原性蛋白资源，适宜用作开发婴幼儿食品和特殊人群营养食品的基料。在稻米各加工领域，每年产生了大量的碎米、米渣、米糠等副产物。制备阶段巨噬细胞增殖酶解工艺实验大米活性肽制备原料处理、提蛋白RP-HPLC分离离子交换树脂分离大孔吸附树枝分离膜过滤分离纯化……大米免疫活性肽二、项目实施方案二、项目实施方案确定制备大米免疫活性肽的最适水解酶通过单因素实验正交实验优化酶解工艺条件。以膜通量与SI值为考察指标，确定对蛋白酶解物进行膜分离的合适工艺条件。根据大米蛋白性质的差异进行分离纯化，并获得若干条具有明确氨基酸序列和结构的大米免疫活性肽。项目项目主要主要研发研发内容内容123三、项目主要研发内容三、项目主要研发内容四、项目进展实施情况四、项目进展实施情况nextstep4step1step3step2制备大米粉碱提酸沉提取大米蛋白凯式定氮法测定蛋白质的含量最适蛋白水解酶的确定1.制备大米粉取米渣用高速粉碎机进一步粉碎过120目筛得到得到粒径小于125μm的大米粉大米粉加NaoH后置于室温搅拌2h3500r/min条件下离心30min取上清液配制2mol/L的HCl调其pH至4.8，酸沉stepstepstepstepstep12345酸沉后离心15min取沉淀洗涤沉淀后冷冻干燥2.碱提酸沉提取大米蛋白消化蒸馏滴定滴定计算用盐酸滴定终点取大米蛋白样品加入凯式定氮消化瓶中，加入试剂，加热，炭化，消化将接受液放入接收将接受液放入接收瓶中，向蒸馏试管瓶中，向蒸馏试管内加样品，内加样品，NaoHNaoH，水封后加热蒸馏，水封后加热蒸馏3.凯式定氮法测定蛋白质的含量四、最适蛋白水解酶的确定通过查阅文献，确定本项目所使用的常用商品酶为胃蛋白通过查阅文献，确定本项目所使用的常用商品酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶。制备一定底物浓度酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶。制备一定底物浓度(m/V)(m/V)的大米蛋白悬浮液，用的大米蛋白悬浮液，用2mol/LNaOH2mol/LNaOH调整调整pHpH，超级恒温，超级恒温水浴调节温度并搅拌水浴调节温度并搅拌30min30min；当温度与；当温度与pHpH达到平衡时，根据加达到平衡时，根据加酶量加入蛋白酶，反应相应时间，用酶量加入蛋白酶，反应相应时间，用pH-statpH-stat法维持反应体系法维持反应体系pHpH的稳定，在的稳定，在80℃80℃以上灭酶以上灭酶15min15min，在，在3500rpm3500rpm下离心下离心1515minmin，取上清液进行旋蒸浓缩、冷冻干燥，得到大米蛋白酶解物，取上清液进行旋蒸浓缩、冷冻干燥，得到大米蛋白酶解物。后将酶解物进行。后将酶解物进行MTTMTT实验，选取实验，选取SI(SI(小鼠巨噬细胞增殖活性刺小鼠巨噬细胞增殖活性刺激指数激指数))为考察指标，确定最适水解酶为胰蛋白酶。为考察指标，确定最适水解酶为胰蛋白酶。经计算得：经计算得：四、研究工作主要进展及结果本项目共分为大米免疫活性肽的制备以及免疫活性肽的分离纯化两个大的步骤，目前本小组已经完成了大米免疫活性肽的制备阶段包括大米蛋白粉的制备、大米原料及大米蛋白粉中蛋白质的含量测定、以及4种商品酶制备大米蛋白酶解物，通过MTT增殖实验确定最适水解酶的过程。现在已经着手进入单因素实验和正交优化实验优化酶解工艺条件，并计划大米酶解物的大量制备，为后期的分离纯化准备充足的原料。1.考虑到时间问题，将单因素实验进行调整，根据相关文献，选取对酶解物考察结果影响较大的温度，加酶量、酶解时间进行单因素和正交试验。2.考虑到项目内容较多，分离纯化方面暂考虑是初步分离纯化，如果时间允许，还是继续往下分离。五、项目内容的调整变动五、项目内容的调整变动确定酶解工艺的单因素实验耗时长实验蛋白提取率不高，需要大量制备原料巨噬细胞增殖实验缺乏可用设备12345本组成员均为大一新生，实验经验不足专业知识储备欠缺，实验设计不熟练六、存在问题及说明1积极查阅文献，解决专业知识问题2学会独立设计单学会独立设计单因素和正交实验因素和正交实验3明确小组人员分工，高质高效的完成项目4跟进研究生项目，多接触实验仪器及熟悉实验方案5暑期提前到校，加快试验进度七、未来展望七、未来展望Thankyou!

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